UNIDAD DE PROTEÓMICA IPBLN

 
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          Extraer proteínas intactas de un gel de poliacrilamida con un alto rendimiento no es fácil. A continuación se mencionan algunos protocolos que pueden ser útiles para ello.
          El acetonitrilo puede extraer algunas proteínas del gel, después el extracto puede ser concentrado en una centrífuga conectada a vacío y analizado por MALDI-MS. Sin embargo, la mejor forma para conseguir extaer la proteína del gel será la electroelución. Se ha observado que las proteínas pueden ser extraidas del gel mediante agitación con disoluciones tampones ácidos/básicos (artículo de Steven L. Cohen y Brian T. Chait).
Otro protocolo alternativo para extraer proteínas del gel (www.abrf.org):
1.-       Recortar las bandas o manchas deseadas y colocarlas en tubos eppendorf. Coger el gel con pinzas.
2.- 
Lavar el gel 3 veces con 1 ml de agua, descartar el sobrenadante cada vez.

3.-    Añadir un máximo de 0,5 ml (preferiblemente menos) de Tris-ClH 100 mM pH 8,5, con SDS al 0,1 %, agitar bien y dejar toda la noche.
4.- Centrifugar y guardar el sobrenadante.
5.- Añadir otros 0,25 ml (máximo) de Tris/SDS, agitar y centrifugar. Combinar el sobrenadante con el anterior.