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TinciONES CON plata (compatibleS con espectrometría de masas)
PROTOCOLO 1 Schevchenko, A. et al. (1996) Anal. Chem .68 , 850-858
1. Fijar el gel en metanol 50 % y ácido acético 5 % durante 20 min.
2. Lavar el gel en metanol 50 % durante 10 min.
3. Lavar el gel en H2O Milli-Q durante al menos 2 horas (El lavado durante toda la noche es mejor porque reduce el fondo en la tinción).
4. Sensibilizar el gel en Na2S2O3 al 0,02 % durante 1 min.
5. Lavar el gel 2 veces en H2O durante 1 min. cada vez.
6. Incubar el gel en AgNO3 al 0,1% durante 20 min. a 4ºC
7. Lavar el gel en H2O durante 1 min.
8. Transferir el gel a un contenedor limpio.
9. Lavar el gel en H2O durante 1 min.
10. Revelar el gel en formalina (35% formaldehído) al 0,04 % y Na2CO3 al 2 %.
11. Cambiar la solución de revelado cuando el revelador cambie a amarillo.
12. Parar la tinción con acético al 5 %.
13. Cambiar la solución de acético al 5 % al menos 2 veces.
14. Guardar el gel at 4º C en acético al 1 %.
PROTOCOLO 2 Adaptado de Blum et al, Electrophoresis, 8, pp93-99, 1987 y Schevchenko, A. et al. (1996) Anal. Chem. 68, 850-858
1. Lavar el gel en etanol al 50% y ácido acético al 5% durante 1 h.
2. Lavar el gel en etanol al 50% durante toda la noche.
3. Lavar el gel en H2O Milli-Q 3 veces durante 10 min
4. Sensibilizar el gel en Na2S2O3.5H2O al 0,02% durante 1 min.
5. Lavar el gel en H2O fría 3 veces durante 30 s
6. Incubar el gel en AgNO3 0,1% durante 20 min. a 4ºC
7. Lavar el gel en H2O 3 veces durante 20 s
8. Transferir el gel a un contenedor limpio
9. Lavar el gel en H2O durante 1 min.
10.Revelar el gel en formalina al 0,05%, Na2CO3 al 3% (para hacer 500 ml de formalina al 0,05% se necesita 0.25 ml de formaldehído al 37%)
11. Cambiar la solución cuando el revelador cambie a amarillo.
12. Parar la tinción con ácido acético al 5 %
13. Lavar el gel 3 veces durante 10 min con H2O Milli-Q
14. Guardar el gel a 4º C en acético al 1%.
TinciONES CON plata (compatibleS con espectrometría de masas)
PROTOCOLO 1 Schevchenko, A. et al. (1996) Anal. Chem .68 , 850-858
1. Fijar el gel en metanol 50 % y ácido acético 5 % durante 20 min.
2. Lavar el gel en metanol 50 % durante 10 min.
3. Lavar el gel en H2O Milli-Q durante al menos 2 horas (El lavado durante toda la noche es mejor porque reduce el fondo en la tinción).
4. Sensibilizar el gel en Na2S2O3 al 0,02 % durante 1 min.
5. Lavar el gel 2 veces en H2O durante 1 min. cada vez.
6. Incubar el gel en AgNO3 al 0,1% durante 20 min. a 4ºC
7. Lavar el gel en H2O durante 1 min.
8. Transferir el gel a un contenedor limpio.
9. Lavar el gel en H2O durante 1 min.
10. Revelar el gel en formalina (35% formaldehído) al 0,04 % y Na2CO3 al 2 %.
11. Cambiar la solución de revelado cuando el revelador cambie a amarillo.
12. Parar la tinción con acético al 5 %.
13. Cambiar la solución de acético al 5 % al menos 2 veces.
14. Guardar el gel at 4º C en acético al 1 %.
PROTOCOLO 2 Adaptado de Blum et al, Electrophoresis, 8, pp93-99, 1987 y Schevchenko, A. et al. (1996) Anal. Chem. 68, 850-858
1. Lavar el gel en etanol al 50% y ácido acético al 5% durante 1 h.
2. Lavar el gel en etanol al 50% durante toda la noche.
3. Lavar el gel en H2O Milli-Q 3 veces durante 10 min
4. Sensibilizar el gel en Na2S2O3.5H2O al 0,02% durante 1 min.
5. Lavar el gel en H2O fría 3 veces durante 30 s
6. Incubar el gel en AgNO3 0,1% durante 20 min. a 4ºC
7. Lavar el gel en H2O 3 veces durante 20 s
8. Transferir el gel a un contenedor limpio
9. Lavar el gel en H2O durante 1 min.
10.Revelar el gel en formalina al 0,05%, Na2CO3 al 3% (para hacer 500 ml de formalina al 0,05% se necesita 0.25 ml de formaldehído al 37%)
11. Cambiar la solución cuando el revelador cambie a amarillo.
12. Parar la tinción con ácido acético al 5 %
13. Lavar el gel 3 veces durante 10 min con H2O Milli-Q
14. Guardar el gel a 4º C en acético al 1%.