UNIDAD DE PROTEÓMICA IPBLN

 
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1.         
Para muestras con volumen de partida de 100 ml.
2.          Añadir 400 ml de metanol.
3.          Agitar bien.
4.          Añadir 100 ml de cloroformo.
5.          Agitar.
6.          Añadir 300 ml de H2O.
7.          Agitar.
8.          Centrifugar 1 min a 14.000  g.
9.          Retirar la capa acuosa superior (las proteínas están entre las dos capas).
10.     Añadir 400 ml de metanol.
11.     Agitar.
12.     Centrifugar 2 min a 14.000 g.
13.     Retirar tanto metanol como sea posible sin remover el sedimento.
14.     Secar en centrífuga de vacío.

Resuspender en tampón de muestra (2X) para SDS-PAGE

Referencias

        Concentración and eliminación de detergentes
Sauve, D. M., D. T. Ho, et al.
(1995). "Concentration of dilute protein for gel electrophoresis." Anal Biochem 226(2): 382-3.

Wessel, D. and
U.I. Flugge (1984). "A method for the quantitative recovery of protein in dilute solution in the presence of detergents and lipids." Anal Biochem 138(1): 141-3.