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Tinción con SYPRO Ruby

(SYPRO® Ruby Protein StainsInstruction Manual)

1.          Retirar el gel de los cristales o placas. Colocarlo en un contenedor o bandeja de plástico. Para geles 2-D, lavar durante 30 minutos en una de las siguientes soluciones fijadoras:

                10% metanol, 7 % ácido acético

                25% etanol, 12.5% ácido tricloroacetico

                10% etanol, 7% ácido acético

                50% etanol, 3% ácido acético

                40% etanol, 10% ácido acético

      (Para geles 1-D no es necesaria la fijación)

2.          Retirar la solución de lavado y cubrir el gel con SYPRO Ruby. Los volúmenes utilizados para geles estándar se proporcionan más abajo. En general usar 10 veces el volumen del gel. El uso de poca cantidad de Sypro puede reducir la sensibilidad.

Tamaño del gel

Volumen de solución de tinción

8 x 10 cm

50 ml

16 x 20 cm

330 ml

20 x 20 cm

500 ml


3.         
Teñir el gel con continua y suave agitación durante al menos 3 horas para máxima sensibilidad. Se puede ver tinción en 30 - 90 minutos. Por conveniencia el gel se puede dejar en la solución de tinción durante toda la noche (16 - 18 h) sin problemas de sobretinción.

4.          Lavar el gel en 10 % metanol (o etanol) y 7 % ácido acético durante 30 - 60 min. para disminuir el fondo fluorescente.

5.          Lavar el gel con agua antes de escanear.

Nota: El uso de SYPRO Ruby muestra dificultades para teñir glicoproteínas y lipoproteínas


Escaneado y obtención de imagen del gel 1D o 2D


        SYPRO Ruby tiene 2 máximos de excitación a 280 nm y a 450 nm, y un máximo de emisión próximo a 610 nm. Las proteínas teñidas pueden ser visualizadas utilizando una gran variedad de fuentes de excitación incluidas UV 300 nm, transiluminador de luz azul y sistemas basados en láser. SYPRO Ruby tienen una excepcional fotoestabilidad y un largo tiempo de vida de emisión, permitiendo largas exposiciones mientras se minimiza el ruido de fondo.