UNIDAD DE PROTEÓMICA IPBLN

 
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1.          Diluir proteína hasta 500 ul con agua en un tubo eppendorf.
2.          Añadir:
  o              50 ml de DOC
  o              25 ml de TX 100
  o              80 mlde TCA (TCA 13 %)
3.          Dejar por lo menos 2 h en hielo.
4.          Centrifugar en una microcentrífuga a 4º C durante 30 min a máxima velocidad (15.000 rpm).
5.          Se formará un sedimento escamoso en los laterales del tubo.
6.          Vaciar, dejar el tubo en un papel para retirar la mayoría del líquido.
7.          Añadir 500 ml de etanol/eter (acetona fría) . Sonicar en un baño para disgregar el sedimento.
8.          Poner en hielo durante 30 min.
9.          Repetir paso 4.
10.     Quedará un depósito pequeño o nada.
11.     Repetir paso 6.
12.     Dejar secar con el aire a temperatura ambiente.
13.     Resuspender las muestras en 5 ml de “running buffer” primero, después 20 ml de “sample buffer”.
14.     Calentar a 85º C durante 5 min.
15.     Cargar muestra a cada pocillo (25ml).


Referencias

             Concentración and eliminación de detergentes
Sauve, D. M., D. T. Ho, et al.
(1995). "Concentration of dilute protein for gel electrophoresis." Anal Biochem 226(2): 382-3.

Wessel, D. and
U.I. Flugge (1984). "A method for the quantitative recovery of protein in dilute solution in the presence of detergents and lipids." Anal Biochem 138(1): 141-3.

            Precipitación de proteínas con TCA
Brown, R. E., K. L. Jarvis, et al.
(1989). "Protein measurement using bicinchoninic acid: elimination of interfering substances." Anal Biochem 180(1): 136-9.